نمو البكتيريا

 طريقة حساب نمو البكتيريا 

تتكاثر الخلايا البكتيرية بشكل سريعا خصوصا في وجود الوسط المثالي لها , ان اكتشاف الانسان لكيفية زرع البكتيريا في اوساط الزراعة ادى  الى ظهور اشكالية تتمثل كيف يقوم بحساب عدد وحجم البكتيريا المتحصلة عليها في الدفعة علما انه لايوجد علاقة ثابت تربط بين زيادة كتلة الخلايا مع عددها.

-عند وضع البكتيريا في وسط زرع هنالك بعض الخلايا البكتيرية التي تنقسم بمعدل سرعة كبير اكثر من زيادتها في الكتل و في هذه الحالة يصبح لدينا مزرعة ممتلىءة بالبكتيريا صغيرة الحجم وفي منحنى تطور البكتيريا تحديدا في الطور المتاخر فإن معدل زيادة كتلة الخلايا قد يفوق الزيادة في عددها و يصبح لدينا خلايا كبيرة الحجم و قليلة العدد,لذلك من الضروري التفريق بين المراحل التي تؤدي لزيادة في عدد البكتيريا او كتلتها .

-في اطوار النمو تتساوى الزيادة في كتلة الخلايا مع اعدادها عندها يجب ان نتعامل مع هذين المعيارين مع بعضهما وفي هذه الظروف حين يتساويا يمكن تطبيق قياس مناظرا للكتلة الخلوية بواسطة الكثافة الضوئية Optical Density  بدلا من قياس عدد الخلايا البكتيرية و في هذه الحالة توجد علاقة طردية بين اعداد الخلية و الكثافة الضوئية و يلاحظ انه يمكن ارجاع نسب كتلة الخلايا في وحدة الحجم 1مل او لتر و لتركيز الخلايا اوكثافتها غرام او ملليغرام.

طريقة حساب نمو البكتريا بواسطة الكثافة الضوئية 

كما ذكرنا الفوق بأنه توجد علاقة طردية بين عدد و كتلة البكتيريا و الكثافة الضوئية  و لكن كيف ؟ 

في الدورق الذي قمنا بزراعة البكتيريا فيه و خلال ملاحظتنا اول ما وضعنا البكتيريا فيه انه يمكن ان ترى من خلاله هناك تكون الخلايا البكترية في مرحلة التأخر اي انها لاتتكاثر تقوم بالتأقلم مع الوسط التي فيها بعد مدة زمنية نلاحظ وجود تعكر في الدورق الخاص بنا دلالة على تكاثر و نمو البكتيريا و نتنظر حتى تصل الخلايا البكتيرية الى مرحلة التوقف فور نفاذ المغذيات و كيف نعرف انها في مرحلة التوقف؟ حسنا عبر قياس شدة التعكر في الدورق في بداية تكاثر البكتيريا يبدأ المحلول المغذي بالتعكر و هنا نقوم بملاحظة التعكر او تصويره حتى بالهاتف لمعرفة شدة التعكر بعد مدة زمنية اعد تصوير الدورق الى ان تلاحظ ثبات في التعكر هنا تكون قد وصلت الى مرحلة التوقف و تبدأبقياس نمو البكتيريا.

الطريقة

-نحضر انبوب و به ماء مقطر نقوم بتسليط الضوء على الانبوب و نقيس شدة الامتصاص (نضعه كشاهد)

-نحضر انبوب اخر و نملأها بمحلول البكتيري المعكر ثم نقوم بتسليط الضوء علية و نقيس شدة الامتصاص من جديد و هنا المسافة التي تكون بين الانبوب و المنبع الضوء تسمى Received   و المسافة بين الانبوب و الشاهد(الانسان) تسمى Transmitted, لدينا المعادلة التالي  نقوم بقسم مسافة  التي تكون بين الشاهد و الانبوب على المسافة بين المنبع الضوئي و الانبوب لنتحصل على نتيجة يطلق عليها بالتحويل Transmittance هذه نتيجة نطبق عليها ناقص لوغاريتم 10 لتعطينا في النهاية النتيجة التي نريدها و هي شدة الامتصاص.

العلاقة هنا كل ما يكون عدد وحجم البكتيريا كبير يزيد من تعكر المحلول الذي بدوره كلما زاد زادت شدة امتصاص الضوء لهذا نقول عليها علاقة طردية زيادة في تعكر= زيادة في امتصاص الضوء.

قصور هذه الطريقة 

ان قياس نمو البكتيريا بطريقة الكثافة الضوئية ليست دقيقة جدا فهناك عوامل تؤثر على الضوء  مثل انعكاس جزء منه في زجاج الانبوب او البكتيريا المدروسة تملك القدرة على التركيب الضوئي و العديد من العومل الاخرى التي تؤثر على هذه العملية و الحل هو اتخاذ الطريقة القديمة و الطويلة لتقدير عددها عبر تخفيف المحلول الاولي في انابيب ثم زرعها في اطباق بيتري و انتظار 12 ساعة على الاقل من اجل ظهور مستوطنات Colonies  ثم عدها .

توجد طريقة اخرى سهلة لكنها تعتمد على الانترنت مثلا لنقول ان لديك مستوطنة من Escherchia coli ثم قم بقياس شدة الامتصاص ووجدتها 0.5 اذهب الى محرك البحث ثم اكتب باللغة الانجلزية Optical density for E.coli 0.5 سيعطيك العديد التقريبي مثلا 10 قوى 4  اي 10000 خلية في ميليلتر الواحد . 

ملاحظة اذا كانت شدة الامتصاص فوق 1 من المحتمل ان هناك خطأ في التجربة التي قمت بها.